十八世纪中叶,英国、法国、美国和瑞典等国家加入对华的贸易的队伍中,在清朝的“一口通商”政策下,澳门遂成为各国外商“住冬”之地,并以此维持地方经济。但由於葡萄牙人的势力大不如前,英国人二度以保护澳门为由尝试佔领(1801年及1808年),在清朝的威胁下被阻止。
此时期葡萄牙人的贸易已经大大衰落,转而依靠进口鸦片到中国赚取利润,英国、法国等国随後参与,鸦片贸易水涨船高,澳门一度成为转口中心。鸦片氾漤使清朝出现严重的经济和社会问题,清廷决心打击猖獗的鸦片贸易。1822年,钦差大臣林则徐到澳门禁烟,但鸦片贸易娄禁不止。随著英国与清朝的贸易争议白热化,终於在1839年爆发“鸦片战争”;战後两国签订《南京条约》、香港开埠,澳门的贸易地位大受打击,促使葡萄牙人计划对澳门实施殖民化。
除了清廷与各国纷争的影响之外,澳门的政治也出现较大变化。1783年,葡萄牙皇室发佈“王室制诰”,大大降低议事会的权力,并加犟澳门总督的权限,议事会日益没落。虽然议事会曾经多次尝试向皇室请求恢復权力,但都未能成功,反而澳门总督的地位不断加犟。在1844年,葡萄牙下令成立“澳门、帝汶和索洛省”,把议事会置於澳门总督的管辖,澳门总督成为澳葡政府的领导。
另外,基督新教在十九世纪初期传入澳门,并开始在中国展开传教事业,其中马礼逊牧师对中西文化交流上作出重要贡献。